酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）試驗(yàn)小常識(shí)

所屬分類(lèi)：

相關(guān)知識(shí)

一、平衡：
　　操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。

　　二、加樣：
　　1、標(biāo)本為血清：最好將血液先自然存放l-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；
　　2、標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rmp離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)；
　　3、加樣后及時(shí)放入孵箱，加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干；
　　4、定期校驗(yàn)移液器，移液器與槍頭要配套，移液不宜太快，排放要完全，槍頭最好一次性使用；
　　5、標(biāo)本較多時(shí)，應(yīng)分批操作。

　　三、孵育：
　　1、貼封片或加蓋；
　　2、用定時(shí)鐘準(zhǔn)確計(jì)時(shí)；
　　3、定期校驗(yàn)恒溫箱；
　　4、在振蕩器上充分混勻再放入恒溫箱。

　　四、洗板：
　　1、保證洗液注滿(mǎn)各孔，但不要溢出，洗板針暢通，洗完板后最好在吸水紙（選擇干凈，無(wú)或少塵的吸水材料）上輕輕拍干；
　　2、合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)；
　　3、配洗液應(yīng)使用純凈的蒸餾水，并防止被污染。

　　五、顯色：
　　1、顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑，肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用；
　　2、加樣時(shí)保持顯色劑不外流。

　　六、終止：
　　加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)成氣泡。

　　七、讀板：
　　1、清潔酶標(biāo)板；
　　2、定期校驗(yàn)酶標(biāo)儀，TMB顯色使用450nm波長(zhǎng)。

　　八、全過(guò)程：
　　1、盡量使用移液器加液，如用滴瓶應(yīng)保證滴瓶垂直向下，持力均勻，滴速不宜過(guò)快，每孔一滴；
　　2、孵育的時(shí)間和溫度應(yīng)嚴(yán)格控制，嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作；
　　3、不同批號(hào)、不同品種的試劑組份不能交叉使用；
　　4、試劑盒應(yīng)在4～8℃儲(chǔ)存，不要長(zhǎng)時(shí)間置于常溫下或反復(fù)凍融，用剩的試劑應(yīng)把瓶子蓋好，板條放在密實(shí)袋內(nèi)，保存在合適的環(huán)境中，盡快用完。